【知识要点】重点知识！23中大《生物与医药》考研知识：合成基因的方式
合成基因的方式01.全基因合成分子较小而又不易得到的基因采用该方式。将双链基因分成若干寡核苷酸单链片段(尤其待合成基因在100个核苷酸以上时)，每个片段长度控制在40～60个碱基，并使每对相邻互补的片段之间有4～6个碱基交叉重叠。在体外将除基因两端末端外的所有片段磷酸化。混合退火后加入DNA连接酶，即可得到较大的基因片段。
02.酶促合成又称基因的半合成。全基因，特别是较大的基因的全部化学合成成本昂贵，使用半合成的方法可以降低成本，从而利于普及使用。
首先合成末端之间有10～14个互补碱基的寡核苷酸片段，退火后以重叠区作为引物，在4种dNTP存在的条件下，通过DNA聚合酶I大片段(Klenow酶)或反转录酶的作用，获得两条完整的互补双链。
03.合成探针人工合成的具有特定顺序的寡聚DN**段，已应用于筛选和鉴定重组质粒或λ噬菌体。实验证明用合成的寡核苷酸片段，即使只有1对碱基错配采用严谨条件杂交也能与完全互补的双链相区别。
04.合成引物合成PCR引物进行基因扩增：PCR技术是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异DN**段的技术。该法操作简便，可在短时间内在试管中获得数百万特异DNA序列拷贝。PCR技术的特异性取决于所用引物和模板DNA结合的特异性。
序列测定用引物：DNA序列测定是分子生物学中最重要和最精细的研究技术，其中最常使用的是末端终止法，即是一种依赖于特异DNA引物的序列测定方法。
05.合成导入突变用的引物利用寡核苷酸引导的突变，可在目的DNA序列的任何部分产生点突变、插入和缺失，从而使得基因编码的蛋白质在结构和功能上发生改变。
06.合成连接子和接头在DNA重组中常需要将外源DN**段插入某些载体DNA中。如果载体或外源DNA上没有合适的限制性内切酶位点，为提高插入效率或实现定向克隆，可采用合成连接子(linker)和接头(adaptor)的方法。
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